IMVIC TEST (İNDOL, METİLEN KIRMIZISI, SİTRAT, VOGES TEST)
IMVIC TEST
(İNDOL, METİLEN KIRMIZISI, SİTRAT, VOGES TEST)
İndol Testi
İndol, IMViC test grubu içinde yer alan testlerden biridir. IMViC testi; Indol, Metil kırmızısı, Voges - proskauer ve Sitrat (Citrat) testlerinin ilk harflerinden oluşur. Vi 'deki "i" küçük harf olarak yazılır ve sadece okuma kolaylığı sağlar. Bu testler, koliform grup bakterilerin (enterik bakterilerin) ayrımı için kullanılır.
İndol testi; bakterilerin, bir aminoasit olan triptofanı ayrıştırarak indol meydana getirebilme yeteneğini belirlemek için kullanılır. Aynı zamanda, bakterilerin cins ve tür ayrımında kullanılır. İndol, bakterilerde bulunan triptofanaz enzimiyle bir aminoasit olan triptofanı parçalanması ve hidrolize etmesi sonucu oluşan nitrojenli bir bileşiktir ve aldehidlerle reaksiyona girdiğinde, kırmızı renkli bir ürün oluşturur. Salmonella’da indol pozitif, Proteus mirabilis’de negatiftir.
Testin yapılış tekniği;
↱ İncelenecek bakteri kolonisinden özeyle alınarak temiz bir tüp içinde bulunan triptofan bulunan bir sıvı besiyerine ekim yapılır (buyyon veya peptonlu su)
↱ Tüpler etüvde, 37oC’de 1-5 gün inkübasyona bırakılır.
↱ İnkübasyondan sonra üzerine, tüpün kenarından yavaşça akıtmak suretiyle 0,5 ml kovaks ayıracı ilave edilir ve tüp çalkalanır. Kovaks yerine Ehrlich ayıracı da kullanılabilir.
↱ Renk değişimi gözlenir; 1-2 dakika içinde besiyerinin üst kısmında, parlak kırmızı bir halka oluşması, testin pozitif olduğunu (indol formasyonunu), sarımsı halka ise testin negatif olduğunu (indol oluşmadığını) gösterir.
Metil Kırmızısı Testi
Metil kırmızısı testi, besiyerinde bakterilerin glukozu fermente edip organik asit oluşturarak besiyerinin pH'ını düşürme (4.4'ün altına) esasına dayanır. Bu test, bakterilerin cins ve türlerinin ayırt edilmesinde kullanılır. Metil kırmızısı testinde; Escherichia coli’de pozitif, Klebsiella pneumoniae’da negatiftir.
Testin yapılış tekniği;
➤ İncelenecek bakteri kolonisinden öze ile alınarak Glukoz-Fosfat Broth besiyerine ekim yapılır.
➤ Tüpler etüvde, 37oC’de 1-7 gün inkübasyona bırakılır.
➤ İnkübasyondan sonra üzerine 4-5 damla metil kırmızısı ayıracı damlatılır ve iyice karıştırılır.
➤ Besiyerinde; kırmızı renk oluşması testin pozitif olduğunu, sarı renk oluşması ise testin negatif olduğunu gösterir.
➤ Metil kırmızısı ayıracı; pH 4.4 ve altında kırmızı renk, pH 6.0 ve üzerinde ise sarı renk verir.
Sitrat Testi
Bazı bakteriler karbon-enerji kaynağı olarak sitrat kullanır. Sitrat testi, bakterinin tek karbon kaynağı olarak sitratı kullanıp kullanmadığını, aynı zamanda bakterinin cins ve türlerini belirlemek için yapılır. Bakteriler tarafından sitratın metabolizması, citritase veya citrate demolase adı verilen enzimleriyle gerçekleşir. Klebsiella pneumoniae’da sitrat pozitif, Escherichia coli’de negatiftir.
Testin yapılış tekniği;
➣ İncelenecek bakteri kolonisinden iğne öze ile alınarak tüpteki Simon’s Sitrat Yatık Agar besiyerinin yüzeyine ekim yapılır.
➣ Tüpler etüvde, 37oC’de 2-7 gün inkübasyona bırakılır.
➣ İnkübasyon sonunda, orijinal rengi yeşil olan ve indikatör olarak %0,2’lik Bromo timol mavisi kullanılan besiyerinde, besiyerinin rengi maviye dönüşür ve pozitif olarak değerlendirilir.
Voges - Proskauer (VP) Testi
Bu test, bakteri türlerini belirlemede kullanılır. Bazı bakteriler, glikozu parçalayarak nötral bir ürün olan asetil metil karbinol (acetoin) oluşturur. Nöral ürünler identifikasyonda önemli göreve sahiptir. Asetil metil karbinol, potasyum hidroksid (KOH) varlığında okside olarak diasetil meydana getirir. Bu ürün ise alfa naftol (kreatin, arginin veya kreatinin) ile reaksiyona girdiğinde kırmızı renk oluşturur. Klebsiella pneumoniae’da pozitif, Escherichia coli’de negatiftir.
Testin yapılış tekniği;
⟹ İncelenecek bakteri kolonisinden öze ile alınarak tüpteki Glukoz-Fosfat Broth besiyerine ekim yapılır.
⟹ Tüpler etüvde, 37oC’de 1-7 gün inkübasyona bırakılır.
⟹ İnkübasyondan sonra üzerine, 1 ml %40’lık KOH, daha sonra 3 ml %5’lik alfa naftol ilave edilir ve karıştırılır.
⟹ Besiyerinin hava ile temas etmesi için kuvvetli çalkalandıktan sonra 2-5 dakika içinde pembe-kırmızı renk oluşması testin pozitif olduğunu gösterir.
IMViC TEST
INSTAGRAM
Post a Comment